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組
pei
培
wu
污
ran
染
如何降低植物組培的污染率 在組培技術(shù)日趨成熟的今天,越來(lái)越多的公司、企業(yè)甚至個(gè)人選擇利用組培技術(shù)進(jìn)行生產(chǎn)化育苗,但在組織培養中通常會(huì )出現不同程度的污染。污染不僅會(huì )對植株造成傷害,增加接種源及污染的機率,而且會(huì )造成很大的經(jīng)濟損失。因此,在市場(chǎng)競爭中,如何降低組織培養的污染率是工廠(chǎng)化生產(chǎn)不可忽視的技術(shù)環(huán)節。 首先,讓我們來(lái)了解一下污染的來(lái)源。植物組織培養污染主要是由霉菌、細菌和酵母菌引起的污染。霉菌和酵母菌在培養條件下生長(cháng)快,容易觀(guān)察到,而細菌潛伏期長(cháng),植物組織一般不表現癥狀,所以很難在前期用肉眼觀(guān)察到。細菌污染的來(lái)源主要有:材料內部滅菌處理不好、內生菌的存在、寄生植物的污染。有些植物的昆蟲(chóng)和螨蟲(chóng)的體表帶有霉菌的孢子和細菌,在九、十月份是重要的污染源,因多種植物昆蟲(chóng)處在大量繁殖階段,此時(shí)大量昆蟲(chóng)造成的污染源最易造成組培污染的嚴重發(fā)生。另外,隨著(zhù)植物材料年齡的增長(cháng),植物材料的健康狀況不斷惡化,組培污染也更加嚴重;其次環(huán)境條件和操作過(guò)程也是引起污染的主要原因。 木木組培根據多年的從業(yè)經(jīng)驗,針對“如何有效降低植物組織培養的污染率”為題,與組培好友共同分享與探討。 01 整個(gè)組培室的規劃設計要合理。 有菌區和無(wú)菌區要進(jìn)行嚴格的區域劃分隔離,減少非必要的進(jìn)出通道,控制污染源;如果培養室面積過(guò)大,要分割成若干面積較小的獨立的培養室,這樣一旦發(fā)生污染,可以形成有效的控制范圍,減少損失;在接種室和培養室要設置一定面積的緩沖間,并且原則上緩沖間的門(mén)和功能室的門(mén)盡量避免在同一個(gè)方向。 02 配備一定數量的滅菌設備并定期檢查。 按生產(chǎn)環(huán)節來(lái)說(shuō),配置培養基的水要保證是無(wú)菌的蒸餾水;進(jìn)行培養基滅菌時(shí)要保證滅菌溫度和壓力,尤其注意當滅菌鍋達到規定的溫度和壓力之后要保證滅菌時(shí)間;接種室的超凈工作臺的初效過(guò)濾網(wǎng)要及時(shí)清洗,要定期檢查超凈工作臺的高效過(guò)濾器的濾膜是否需要更換,接種過(guò)程中要對接種工具進(jìn)行消毒避免交叉感染;接種室和培養室都要配備一定的滅菌設備定期進(jìn)行室內環(huán)境的整體消毒殺菌,最大限度確保無(wú)菌區的潔凈程度符合生產(chǎn)要求。 03 制定科學(xué)合理的組培室無(wú)菌操作規程。 在無(wú)菌操作過(guò)程中,工作人員嚴格按照無(wú)菌操作的要求,規范熟練地完成好每一個(gè)步驟,能有效地減少由操作引起的污染。具體要求如下: 一、接種前,工作人員的雙手必須用肥皂水洗凈,進(jìn)入接種室后換上工作服、戴上口罩,用75%的酒精擦拭消毒雙手; 二、用75%的酒精擦拭超凈工作臺,接種工具(如剪刀、手術(shù)刀、鑷子等)使用前要在75%酒精中浸泡,再在火焰上灼燒,冷卻后使用; 三、在超凈工作臺上正確擺放接種用具、培養材料和培養基,臺面上的東西不能堆放太多,以免影響氣流; 四、接種過(guò)程中應避免他人來(lái)回走動(dòng),操作人員禁止談話(huà),并盡量避免操作人員頭部伸入超凈工作臺的工作區內; 五、培養瓶的開(kāi)啟、接種材料的切割、分裝、封口等步驟要規范熟練,避免交叉污染; 六、每切割、轉接完一瓶母種材料后,要及時(shí)更換無(wú)菌紙,重新更換所用的接種工具,最好備兩套交替使用。 04 其他注意事項: 一、配備相應的化學(xué)試劑進(jìn)行必要處理。在生產(chǎn)過(guò)程中,如有必要,可在培養基中加入適量的抑菌劑以控制污染。 二、在繼代培養時(shí)一定要仔細檢查,避免對污染的材料進(jìn)行擴大增殖。 三、定時(shí)對培養基進(jìn)行觀(guān)察,出現污染狀況要進(jìn)行及時(shí)清理。
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