桉樹(shù)是世界著(zhù)名的速生豐產(chǎn)用材樹(shù)種。我國引種桉樹(shù)已經(jīng)有120年的歷史，是廣西、廣東、海南等華南各省的最主要造林樹(shù)種，可在平原、臺地、丘陵、低山等地貌的林地種植，是近年來(lái)發(fā)展速度較快的樹(shù)種。并且，桉樹(shù)具有較高的經(jīng)濟價(jià)值和廣泛的用途，它是造紙原料的重要來(lái)源，它的木材還可以加工成家具，不但質(zhì)量好，而且十分美觀(guān)。而桉樹(shù)組培的成功，主要解決了一些難以生根的樹(shù)種或無(wú)法采用扦插方法增繁無(wú)性系的繁殖問(wèn)題，加快優(yōu)良無(wú)性系的繁殖速度，桉樹(shù)組培苗的生產(chǎn)前景非常廣闊。

PART 1

組培器材

桉樹(shù)組織培養是一項技術(shù)性很強的工作，無(wú)菌條件要求嚴格，對實(shí)驗室設備及人員的操作技術(shù)要求較高，組培實(shí)驗室應配備下列設備。
　　第一、洗滌設備：設置洗滌室、洗滌劑及各種洗滌工具。
　　第二、滅菌設備：設置高壓高溫滅菌鍋。
　　第三、化學(xué)實(shí)驗設備：設置實(shí)驗臺架、藥品柜、冰箱、天平、各種、玻璃器皿、PH計、攪拌器等。
　　第四、無(wú)菌操作設備：設置接種室、超凈工作臺、鑷子、剪刀、解剖刀及酒精燈等。
　　第五、培養設備：設置培養室、培養容器、三角瓶、罐頭瓶等。

植物組織培養應用的培養基，一般都包括大量元素、微量元素和碳水化合物，并添加各種各樣的附加物，如維生素、氨基酸、生長(cháng)素、細胞分裂素等。
　　桉樹(shù)芽的誘導可選用N6和MS等作基本培養基、胚狀體的誘導可選用B5H及改良H等作基本培養基。

PART 2

組培流程

目前，桉樹(shù)無(wú)性系組織多采用外植體直接誘導腋生叢生芽，然后切取足夠長(cháng)度，長(cháng)得健壯的小芽轉到生根誘導培養基中，形成生根植株。采用這種方法，桉樹(shù)的遺傳性最穩定。

采集對象為桉樹(shù)嫁接苗或伐樁、環(huán)割、萌芽條。截取具有半木質(zhì)化程度的嫩梢，長(cháng)度為5~10cm。試驗證明，3~5月份桉樹(shù)萌芽率較高，莖部積累有較豐富的營(yíng)養物質(zhì)和內源激素，受病蟲(chóng)侵害較少、外植體誘導成功率最高。7~9月份屬高溫高濕季節，水分、溫度都較高，病蟲(chóng)十分活躍，莖段機械損傷較多，易受病、蟲(chóng)菌的侵害污染，故誘導成功率最低。因此外植體采集最好是在春季進(jìn)行，以芽條腋芽開(kāi)始膨大，芽鱗片還未裂開(kāi)時(shí)為最佳時(shí)機。芽條在植株上的部位也是誘導芽能否成功的重要因素。試驗證明，萌芽條中上部的莖段，以半木質(zhì)化的莖段第5~第7節最好，因為較易進(jìn)行表面滅菌處理，而且不容易褐化，萌芽率也高；過(guò)嫩的芽木質(zhì)化程度低，表面滅菌很容易被殺死；過(guò)老的莖段表面滅菌時(shí)容易褐化而死亡，而且過(guò)老的莖段再生能力差而不易萌芽。

將采回的桉樹(shù)嫩莖段剪去葉片，用少量洗衣粉水漂洗10分鐘，再用流動(dòng)水沖洗半小時(shí)左右，然后在無(wú)菌條件下用75%酒精浸泡5秒鐘，再用新潔爾滅溶液或0.1﹪升汞溶液浸5~6分鐘消毒，用無(wú)菌水沖洗4~5次，然后切取含1~2個(gè)腋芽的莖段接種在培養基上進(jìn)行誘導培養，試驗證明，重復消毒一次效果更佳。

桉樹(shù)莖段接種后，如切口處產(chǎn)生褐色滲出物，使莖段周?chē)呐囵B基變成棕褐色，這種現象就叫“褐變”。莖段在培養基內變褐色就會(huì )失去生命力，導致外植體死亡、嚴重地影響了外植體誘導的成功率，可采取以下措施綜合防治。

①.盡量避免組織傷害，用于切割的解剖刀應盡可能鋒利。

②切割外植體時(shí)，應當把組織浸于水中隔絕空氣，同時(shí)，切面要垂直，切口的損傷要減至最低的限度。

③接種時(shí)應選擇表面消毒過(guò)程中沒(méi)有損傷的莖段，并注意不讓腋芽附著(zhù)培養基。

④利用漫射光培養。由于光能提高多氧化酶的活性，從而促進(jìn)多酚化合物的氧化，因此在弱光下培養，能有效地降低多酚氧化物的氧化。

⑤及時(shí)轉移培養基，當發(fā)生褐變時(shí)應及時(shí)轉移培養基，使褐化不影響腋芽周?chē)慕M織，外植體仍有萌動(dòng)的生命力。

PART 3

增值培養

繼代苗的增殖培養是指將誘導形成的胚狀體、芽叢等轉接入培養基內，使其產(chǎn)生更多的芽體。

將誘導出的芽體轉接到繼代苗培養基里，然后放置于培養室內，室溫為25℃——28℃為宜，光照強度為1500——3000LX為佳。過(guò)強的光照易使苗木老化，過(guò)弱的光照易使苗木徒長(cháng)，所以控制好光照很重要。經(jīng)過(guò)了七天左右的暗培養，即可見(jiàn)萌生出多叢嫩芽，經(jīng)過(guò)1——2天的自然光照后，即可開(kāi)日光燈增強光照。若發(fā)現霉菌及真菌感染的苗，要及時(shí)拿去高溫消毒，以免傳染了其他的瓶苗。

玻璃苗：是指由于苗木不能及時(shí)見(jiàn)光，苗木木質(zhì)化低。表現為葉片及嫩梢呈現出透明或半透明狀態(tài)，含水量增加，葉片脆弱易碎，這種狀態(tài)的苗木很難增殖及生根，移栽時(shí)不易成活。解決辦法：及時(shí)見(jiàn)光。苗木進(jìn)行暗培養七天以后，立即見(jiàn)自然光1——2天，然后即可打開(kāi)日光燈進(jìn)行補光。日光燈照一周后即可將瓶苗移到窗口進(jìn)行煉苗，使其吸收更加強烈的自然光照，以加快苗木的木質(zhì)化程度。

褐化:是由于培養基中的酚類(lèi)物質(zhì)被氧化，使苗木周?chē)呐囵B基呈現褐色。褐化會(huì )使苗生長(cháng)緩慢，也容易變成變態(tài)苗，這樣會(huì )影響后面的生根增殖。解決辦法：及時(shí)轉換培養基。

PART 4

生根培養

繼代苗經(jīng)過(guò)了多次繼代增殖后，會(huì )長(cháng)出許多叢芽，主芽多且明顯，而且芽叢煉至半木質(zhì)化時(shí)即可進(jìn)行大量生根接種，以獲取完整生根植株。進(jìn)行生根接種時(shí)，應當選取干凈、不帶菌的繼代瓶苗，在超凈工作臺中，用消毒好的剪刀剪取頂芽粗壯，葉片展開(kāi)良好的半木質(zhì)的一段繼代苗，長(cháng)度約為1.5厘米，插入生根培養基中。每瓶視情況插入15——20棵苗。生根苗接好后將其置于培養室中，室溫控制在25℃——28℃，與繼代苗的管理方法相同，也是進(jìn)行七天左右的暗培養，待生根苗基部冒出根以后，即可打開(kāi)日光燈讓其見(jiàn)光。經(jīng)過(guò)兩周左右，待苗木的根長(cháng)到2——3厘米，葉片充分展開(kāi)時(shí)，即可送至玻璃煉苗棚進(jìn)行煉苗，使其充分吸收和適應自然光線(xiàn)。經(jīng)過(guò)十天左右的煉苗，生根苗的根系發(fā)達，葉片和莖段的顏色由淺綠變成深綠，而且長(cháng)得非常茂盛時(shí)，木質(zhì)化程度較高時(shí)，即可進(jìn)行生根苗的移栽。

(1)污染嚴重造成生根瓶苗污染嚴重的原因有

①用消毒不徹底的器具進(jìn)行接種,或者超凈工作臺未擦拭干凈,或者培養基消毒不徹底。

②用作生根接種的繼代苗本身就被真菌或者細菌感染。

③接種室或者培養室衛生狀況差。

針對以上原因，應對的辦法是：首先應當確保接種室和培養室的衛生，每天接種前應打開(kāi)紫外線(xiàn)消毒燈進(jìn)行半小時(shí)消毒，室內地板應當保持干凈整潔，超凈工作臺應用新潔爾滅擦拭過(guò)；其次確保用作接種材料的繼代苗要干凈無(wú)污染，接種時(shí)接種器具（如剪刀、鑷子、盤(pán)子）都應進(jìn)行高壓滅菌，特別是培養基也應進(jìn)行40分鐘左右的消毒。操作的時(shí)候，剪刀、鑷子還應當用消毒器再次進(jìn)行消毒，時(shí)間為3——5分鐘每次。只有每個(gè)環(huán)節都做好，才可以減少污染，降低苗木成本，提高苗木質(zhì)量。

(2)生根率不高生根苗生根率不高，是由于生根激素不足或者不適合；其次是由于接種時(shí)選取的芽不好，木質(zhì)化程度不夠或太弱或玻璃化。所以，遇到生根率不高時(shí)，應當及時(shí)調整培養基配方，在接種時(shí)也要選取壯苗、優(yōu)質(zhì)苗進(jìn)行接種。

當生根瓶苗煉苗至苗木充分木質(zhì)化、葉片舒展、葉色濃綠、莖軸、根系伸長(cháng)時(shí)即可移栽至育苗袋內種植。移栽前用0.15%~0.3%的高錳酸鉀溶液進(jìn)行基質(zhì)消毒。移栽時(shí)，倒出培養基，小心洗去殘留在根上的培養基，并截去過(guò)長(cháng)的根，保留2cm左右，用0.1%的殺菌劑進(jìn)行小苗消毒處理，根部再經(jīng)IBA生根激素溶液處理后移入育苗基質(zhì)中，然后置于育苗架上，在70%遮光度的蔭棚內培育25~30天。移植初期要覆蓋塑料薄膜保溫保濕，等小苗高3cm生長(cháng)穩定后即可進(jìn)行露天煉苗，當小苗長(cháng)至15~20cm時(shí)可以出圃造林。

PART 5

車(chē)間管理

接種室是進(jìn)行組培研究或者組培生產(chǎn)工作最關(guān)鍵的地方，應當保持干爽安靜、明亮清潔，保持良好的無(wú)菌或者低菌狀態(tài)，應當與外界保持相對隔絕，盡量減少與外界空氣對流，減少粉塵和微生物的侵入。所以，接種室外應有緩沖間，并配上密閉的拉門(mén)，減少與空氣對流。
    每天接種前應先進(jìn)行接種室的消毒工作，即開(kāi)紫外線(xiàn)消毒燈照射半個(gè)小時(shí)，超凈工作臺也應當使用紫外線(xiàn)消毒燈消毒至少20分鐘，關(guān)閉紫外線(xiàn)燈后使氣體散出后即可開(kāi)始操作。另外，每十天或者半個(gè)月應當使用40﹪的甲醛加少量高錳酸鉀進(jìn)行密封熏蒸消毒。
　　接種操作前，應用75﹪的酒精或者2.5﹪的新潔爾滅擦拭工作臺、手臂以及進(jìn)行接種的材料。
　　注意接種室的衛生，不得在接種室內吃東西，平時(shí)每天下班要安排人員清掃接種室，以及及時(shí)清理掉不用和污染的接種材料。以減少污染源。
　　接種操作間應當穿上干凈的工作服、戴口罩、工作帽，出入時(shí)應當換拖鞋，以保持接種室的干凈整潔。

培養室的要求與接種室基本一樣，也需要干凈、整潔、干燥，室溫要保持在25℃——28℃。室內要定期消毒，用40﹪的甲醛加少量高錳酸鉀進(jìn)行密封熏蒸消毒。另外，培養室在設計時(shí)應當考慮光照問(wèn)題，墻面以白色為主，窗口盡可能多一些，以利于采光，這樣有利于煉苗。